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蛋白质纯化策略及影响因素

蛋白质纯化策略及影响因素

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  • 发布时间:2022-05-16 16:37
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【概要描述】在进行蛋白质纯化之前,应该对蛋白质进行研究,包括其性质、敏感性,如其溶解性、对高盐或pH的敏感性、易氧化等。

蛋白质纯化策略及影响因素

【概要描述】在进行蛋白质纯化之前,应该对蛋白质进行研究,包括其性质、敏感性,如其溶解性、对高盐或pH的敏感性、易氧化等。

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  今天分享一些蛋白质纯化过程中应该考虑的因素。

  1.在进行蛋白质纯化之前,应该对蛋白质进行研究,包括其性质、敏感性,如其溶解性、对高盐或pH的敏感性、易氧化等。

  2.需要考虑使用蛋白来决定蛋白制备的量级,这取决于色谱柱的大小,得到的蛋白的浓度,是否需要保持其活性,避免不必要的污染物;

  3.蛋白质的检测方法。对于含有不同成分的蛋白质溶液,检测方法通常是不同的。考虑到其灵敏度、精密度和准确度,在不同的净化步骤中应选择不同的检测方法。

  4.蛋白质缓冲添加剂,为了提高蛋白质的稳定性,防止微生物生长,降低冰点或保持蛋白质活性等,通常可以加入各种表面活性剂、金属螯合剂、蛋白酶抑制剂、防腐剂、还原剂等缓冲成分;

  5.蛋白质的储存条件,在保证活性的前提下,其适合温度,能否冷冻,反复冷冻解冻,储存容器等。

  蛋白质纯化之前需要研究序列信息,通过软件分析可以间接获得蛋白质的一些基本信息属性。在表达过程中,选择细菌、真菌还是动物细胞系统比较好,表达后是否保证正确的翻译和修饰,克隆时哪个标签更容易过量表达和纯化。采用何种工艺对表达的提取物进行细胞破碎,破碎过程中是否会引起蛋白质变性、结构变化、降解和稳定性变化等。蛋白质纯化过程,如盐析、有机溶剂沉淀、或离心、电泳、层析柱等方法,通过粗提、再纯化、期间的纯化顺序直至大规模生产。


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