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FC融合蛋白纯化应用案例

Fc融合蛋白是指将目标蛋白(protein of interest, POI)与免疫球蛋白(如IgG、IgA等)的Fc片段融合而产生的新型重组蛋白。该目标蛋白(POI)可以是细胞因子、受体、抗原肽或者其它具有生物学活性的功能蛋白分子。大多数情况下,Fc融合蛋白不仅可发挥所融合蛋白的生物学活性,还具有一些抗体的性质,有潜在的临床治疗能力。这种将目标蛋白与Fc进行融合的设计,主要目的是通过延长血浆半衰期,加强其治疗能力,同时,融合Fc片段能够增大分子体积,降低肾清除率。
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应用描述
参数

简介

 

  Fc融合蛋白是指将目标蛋白(protein of interest, POI)与免疫球蛋白(如IgG、IgA等)的Fc片段融合而产生的新型重组蛋白。该目标蛋白(POI)可以是细胞因子、受体、抗原肽或者其它具有生物学活性的功能蛋白分子。大多数情况下,Fc融合蛋白不仅可发挥所融合蛋白的生物学活性,还具有一些抗体的性质,有潜在的临床治疗能力。这种将目标蛋白与Fc进行融合的设计,主要目的是通过延长血浆半衰期,加强其治疗能力,同时,融合Fc片段能够增大分子体积,降低肾清除率。
  近年来,生物药市场保持高速增长的趋势,抗体药物、融合蛋白药物在肿瘤、自身免疫病发挥了巨大的作用,造福患者的同时助推这两个细分市场持续扩容。2018年上半年全球药物销售额Top 15 ,Fc融合蛋白类药物(Amgen/Pfizer的Enbrel和Bayer/Regeneron的Eylea)销售占两席,其中Enbrel的2018年上半年销售额达34.64亿美元。


纯化工艺


  FC融合蛋白在动物细胞表达上清中稳定性较差,容易形成降解和多聚。如何去除产品相关杂质,如降解和多聚,以及除去工艺相关杂质,如HCP、Protein A 脱落等,提供了如下纯化方案:

  1.用亲和捕获Fc融合蛋白;
  2.用疏水层析进一步去除降解片段及错配抗体;
  3.用阳离子层析去除大量的聚集体。

 

结果


  经过第一步UniMab® 50 进行捕获,纯度提高到 80% 以上,ProA 脱落小于10 ppm 、HCP残留小于1000 ppm ;Uni®HR Phenyl-30L进一步去除降解片段、错配抗体、ProA 脱落、HCP残留;NanoGel- 50SP精纯后,ProA 脱落小于1 ppm , HCP残留小于50 ppm,纯度大于95%,符合抗体药物残留标准。

 

注:获得完整版信息,请联系我们

 

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